甲基化检测

甲基化检测

简介

DNA的甲基化（Methylation）是最早发现的基因表观修饰之一，甲基化仅修饰胞嘧啶，DNA的甲基化修饰是在DNA甲基化转移酶的作用下使CpG双核苷酸5'端的胞嘧啶转变为5'-甲基胞嘧啶，由于CpG岛主要位于基因的启动子和第一外显子区域，其甲基化修饰通常抑制基因的表达，去甲基化后基因重新活化和表达。甲基化可以影响基因的活性而不涉及DNA序列本身的改变，在维持基因组稳定性和调节基因表达中起着关键作用。

DNA甲基化在许多生物学过程中都具有重要作用，包括胚胎发育、细胞分化、基因转录调控和基因组稳定性。它也被发现与一些疾病和疾病进展有关，如癌症等。因此，研究DNA甲基化及其影响对于理解基因组功能和疾病机制至关重要。

方法

1、甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR，MSP）：用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，甲基化的胞嘧啶不会发生改变，设计针对甲基化序列的引物进行PCR扩增，然后通过电泳等检测手段检测MSP扩增产物来确定位点是否存在甲基化。

2、亚硫酸氢盐测序法（Bisulfite sequencing PCR，BSP）：与MSP相似，用亚硫酸氢盐将未甲基化胞嘧啶转化为尿嘧啶，设计BSP引物进行PCR，扩增中尿嘧啶全部转化为胸腺嘧啶，对PCR产物进行测序来判断CpG位点是否甲基化。

3、高分辨率溶解曲线法（High Resolution Melting，HRM）：原理也是用亚硫酸氢盐处理，未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增变成胸腺嘧啶，样品中的GC含量发生变化从而溶解温度发生变化，从而确定位点是否发生甲基化。

4、甲基化特异性限制酶消化: 此方法使用特异性限制酶来鉴定DNA中的甲基化位点。甲基化CpG位点可能会影响特定限制酶的酶切位点，因此可以通过消化和分析DNA片段的大小差异来检测甲基化水平。

5、甲基化芯片或测序技术: 这些高通量技术可以全面分析DNA甲基化模式，包括全基因组水平上的甲基化位点的鉴定和定量。

样品要求

1）基因信息 (请提供详细的序列或NCBI登录号)。我们会根据您提供的基因序列信息和选择的检测方法，进行甲基化检测。

2）样品要求：

基因组DNA无明显降解，总量≥10 μg，浓度≥100 ng/μl；

动物组织：不少于200 mg；

动物细胞：细胞数不少于107以上；

血液样：全血不少于0.5 ml；

植物根茎叶等组织：不少于500 mg 。