CHIP实验

　　浏览量：　　发布时间：2023-03-14

CHIP实验

简介

染色质免疫沉淀法(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP) 是一种基于抗原抗体反应的特异性，从而起到选择性地使DNA 结合蛋白及其 DNA 靶标富集的作用，是在全基因组水平研究生命体组织或细胞内蛋白质与DNA相互作用的一种技术方法。

原理

首先在活细胞状态下固定蛋白质－DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后利用抗原抗体反应的特异性，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片段的纯化与检测分析，获得蛋白质与DNA相互作用的信息，可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。ChIP 可用来研究某种特殊的蛋白-DNA 相互作用、多种蛋白-DNA 相互作用或全基因组或部分基因内的相互作用。

步骤

1、细胞处理与交联：以生长状态的细胞为基础，进行交联处理，添加足够的交联剂。确保交联反应达到足够的程度，通过加入甘油或甲磺酸进行终止反应。

2、细胞裂解与染色质提取：裂解细胞，释放染色质。加入裂解缓冲液，含有保护蛋白和DNA的抑制剂。离心去除细胞核，收集上清液含有染色质。

3、免疫沉淀：预先吸附抗体至蛋白A/G磁珠或琼脂糖上。加入染色质上清液和抗体复合物，进行免疫沉淀。

4、反交联与DNA纯化：去除交联，将蛋白与DNA解离。经蛋白酶K处理后，纯化DNA片段。

5、PCR或测序分析：使用PCR或实时PCR技术验证某个基因或区域的存在。或者进行测序，获得染色质中的DNA序列信息。