悬浮细胞培养

悬浮细胞培养

简介

悬浮细胞培养是一种将细胞培养在液体培养基中而不依赖于固体表面的培养方法。在悬浮细胞培养中，细胞以单个细胞或小团聚体的形式悬浮在培养基中，通过提供营养物质和适宜的环境条件，使细胞能够在体外快速增殖。

培养基

悬浮细胞培养用培养基是专门设计用于支持细胞在悬浮状态下生长和增殖的培养基。它们通常包含以下组成部分：

1、基础培养基：包括维持pH平衡的缓冲剂，如HEPES或Tris缓冲液，以及维持渗透压稳定的盐类和糖类成分。基础培养基还可以包含一些细胞生长和分裂所需的必要营养成分，如氨基酸、维生素和微量元素。

2、补充物：悬浮细胞培养基通常需要添加一些额外的补充物来增强细胞的生长和增殖能力。这些补充物可以包括血清或血清替代物、生长因子、激素和胶原或基质组分等。

3、抗生素：为了防止细菌和真菌等微生物的污染，悬浮细胞培养基中通常添加一些抗生素，如青霉素、链霉素或红霉素等。

4、pH指示剂：为了方便检测和调节培养基的酸碱度，悬浮细胞培养基中通常添加pH指示剂，如酚红、溴酚蓝或酚酞。

悬浮细胞培养用培养基的设计旨在提供细胞生长和增殖所需的适宜环境，以支持研究和生产领域中对悬浮细胞的培养和扩增需求。

到货处理

本公司悬浮细胞出库采用离心管发货的方式，客户共收到2支15ml离心管，每支离心管细胞量为5x10⁵，离心管中培养基无需舍弃，可直接用于培养细胞。

到货后需对细胞进行传代，首次传代推荐1:2传代。根据培养经验以及客户的反馈，传代时使用半换液法对细胞状态有利，因此我库建议您使用半换液法进行传代。

在收到细胞后，请不要通过离心的方式收集细胞，可以直接将每支离心管中细胞吹打均另后移入两个新的 T25 培养瓶中继续培养即可(即2支离心管中细胞悬液分到4个 T25 瓶中)。

悬浮细胞复苏

悬浮细胞复苏初期细胞量较少，生长较为缓慢，建议初期使用竖瓶培养，后期待细胞状态恢复，可改为横瓶培养。

竖瓶培养可以促进细胞生长，但由于拿出来观察时都是横瓶，观察久了细胞会贴到底部，观察完再次竖起来就会有细胞挂在瓶底部，而细胞没有培养基滋润很快就会死死亡并残留在壁上，从而导致细胞越来越少，贴壁细胞越来越多；因此，在培养瓶竖置操作时需注意吹下培养瓶底部的细胞，避免细胞残留。

悬浮细胞传代

离心传代

收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-3ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培养基的培养瓶中。

半换液传代

以1:2传代为例：在培养瓶中加入等量的新鲜完培，轻微吹打均匀，将细胞悬液均分到两个培养瓶中即可。

离心传代法可能导致细胞受到机械损伤，因此更推荐使用半换液法传代。

悬浮细胞换液

若悬浮细胞初始培养时细胞量较少，状态不佳，生长缓慢，可使用沉降换液法每4-5天将旧培养基替换为新鲜培养基，并适当提高血清浓度。

离心换液可能导致细胞量的损失，不推荐使用。

沉降换液法：即不使用离心机而是利用重力自然沉降的方法，将培养基与细胞分离，达到全部或部分更换新鲜培养基。但是其有应用局限性—只适合能成一定大小细胞团（否则无法自然沉降，只能低速离心）的细胞，尤其是处理依赖细胞聚集才能增殖的细胞时非常值得推荐，如NK-92、Jurkat。该方法能在换液过程中最大限度避免离心过程造成的机械损伤，同时保留聚集的细胞团，并且去除细胞碎片也较为彻底。

细胞贴壁

悬浮细胞静置时间过长，细胞沉底后会出现少量贴壁现象，但是是属于轻轻贴壁，只需轻轻吹打一下或拍一下就可以，此现象为正常现象，无需额外处理操作。如果细胞贴得非常紧，已长出形态时，可能为细胞特性或者有其他因素刺激导致。