transwell迁移实验

　　浏览量：　　发布时间：2023-03-14

transwell迁移实验

背景

trans是转移之意，well是小室之意，合起来的意思就是穿过小室，将小室置于培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，小室底层有一张通透性的膜（一般为聚碳酸酯膜），将上下层培养液分隔开。被研究的细胞被培养在上室，由于聚碳酸酯膜有通透性，下室内培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响，且通过应用不同孔径和经过不同方法处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。

利用transwell侵袭实验可以检测肿瘤细胞的侵袭能力。未铺胶的transwell实验检测细胞的迁移能力，铺胶的transwell实验检测细胞的侵袭能力。迁移和侵袭是两个概念。迁移是指细胞的运动能力，而侵袭是细胞在运动的同时会分泌出消化ECM的蛋白，清除运动障碍，这个实验更能模拟人体内环境。

细胞迁移是细胞在外界信号（如：趋化因子）的作用下从一个区域转移到另一区域的运动。这个过程在在生理和病理学方面都发挥着重要的作用，比如损伤修复、细胞分化、恶性肿瘤转移、免疫细胞的迁移、组织修复等。

细胞侵袭与细胞迁移比较类似，但是“侵袭”需要细胞穿过胞外基质层（ECM）或基底膜基质层（BME），在这个过程中细胞先酶解去除ECM/BME的阻碍，从而在趋化因子浓度梯度驱使下完成从一处到另一处的移动。
原理

Transwell实验，也称为Transwell迁移或侵袭测定，是一种用于细胞生物学和分子生物学的实验室技术，用于研究细胞通过多孔膜的运动。它通常用于研究细胞对各种刺激(如生长因子、趋化因子或细胞外基质成分)的迁移、趋化性和侵袭。Transwell实验对于评估细胞通过多孔屏障迁移或侵袭的能力特别有用，多孔屏障模拟细胞必须穿过体内组织的生理条件。Transwell实验涉及Transwell小室(插入物)和孔板，它们是一种由分隔两个隔室的渗透膜组成的装置。通常，顶部室充满细胞，而底部室包含化学引诱剂或诱导细胞迁移的物质。多孔膜允许细胞通过膜上的小孔从顶部室迁移到底部室。

Transwell实验根据是否在小室内添加基质胶分为两种类型：迁移测定(未在小室内添加基质胶)：在这种类型的测定中，细胞从顶部室迁移到底部室，但不需要降解或侵入膜。这种类型的测定测量细胞响应化学引诱剂梯度而移动的能力。侵袭测定(需在小室内添加基质胶)：在侵袭测定中，细胞不仅通过多孔膜迁移，还需要通过通常涂覆在膜顶部的细胞外基质(ECM)层降解或侵袭。例如，侵袭测定通常用于研究肿瘤细胞的侵袭行为。Transwell实验是体外研究细胞行为的重要工具，可以深入了解各种生物过程，包括癌症转移、免疫细胞迁移和组织发育。通过计算小室底部或培养液内迁移或入侵的细胞数量，或通过测量各种细胞参数(例如细胞运动和趋化反应)的变化来量化细胞行为。

步骤

1. 基质胶的准备： 4℃隔夜解冻Matrigengel，实验前转移到冰盒中；将提前准备好的冰放置冰盒中，凝胶前的操作均在冰上操作。将枪头、离心管与放有Transwell小室的24孔板放入冰盒预冷，并用预冷枪头将Matrigengel混匀。

2.基质胶铺板：稀释Matrigengel，按Matrigenge和无血清培养基以1:8的比例进行稀释；将稀释后的Matrigengel，垂直加入Transwewll上室中，均匀平铺在底部；放入培养箱（37℃，5%CO2)中3h，使Matrigengel聚合成凝胶薄膜。将上室中多余液体吸掉，在每孔中加入无血清培养基，再置于培养箱30min，进行基底膜水化。

3.制作细胞悬液：制作细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12-24h，进一步去除血清的影响（此步骤可选择操作）；取汇合度达70%-80%的细胞进行消化，终止消化后将弃废液离心，接着用无血清培养基重悬细胞，调整细胞密度至2.5×105/mL。

4.接种细胞：在24孔板下室加入500µL含10%FBS培养基。然后用镊子将Transwell小室置于24孔板内（注意：下层培养液和小室间经常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板）；每孔加入200µL细胞悬液到Transwell上室；培养箱培养24h后可进行固定染色。（时间点可根据肿瘤细胞侵袭能力而定，一般24-48h，还需要考虑细胞状态和消化时间对细胞的影响。）